Die Vorbereitung der Proben für die Beobachtung in der Elektronenmikroskopie, erfordert die größten Vorsichtsmaßnahmen bei der Verwendung von mehreren Lösungen nach Ihrem Protokoll in verschiedenen Phasen, die Achtung auch der verschiedenen bestimmenden und sehr wichtige Parameter wie:
- den pH-Wert /Puffer,
- Typ des Puffers entsprechend der Probe,
- Osmolarität der Bindungsmischung
- Temperatur
- Dauer der Fixierung.
The pH of the different cell compartments can vary, so you need to adjust the pH of your buffer solutions according to your studies. In general, in more than 50% of the cases the buffers remain close from 7 to 7.4 A buffer solution maintains approximately the same pH despite the addition of small amounts of an acid or base, or despite dilution.
phosphate or PB: A simple phosphate buffer is used ubiquitously in biological experiments, as it can be adapted to a variety of pH levels, including isotonic. This wide range is due to phosphoric acid having 3 dissociation constants- Phosphatierte Kochsalzlösung oder PBS : PBS ist vielseitig einsetzbar, da sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist. Zu diesen Verwendungszwecken gehören das Verdünnen der Substanz und das Spülen der Zellen. PBS mit EDTA wird auch verwendet, um angeheftete und verklumpte Zellen freizusetzen. Dieser Puffer wird in der Zellkultur unter kontrollierter Atmosphäre in Inkubatoren mit 5 % CO2 verwendet.
- D-PBS: Das The DPBS is Dulbecco’s PBS und auch als CMF-PBS (calcium-magnesiumfrei oder Ca Mg Free) bekannt. Ca Mg Free).
- Kacodylate : Natriumcacodylatpuffer [Na (CH3) 2 AsO2 – 3H2O] ist eine Alternative zum Sørensen-Phosphatpuffer. Er hat eine gute pH-Pufferkapazität im pH-Bereich von 5,0-7,4. Cacodylat wurde von Sabatini et al. (1962) für die Elektronenmikroskopie eingeführt, um die Zugabe von zusätzlichen Phosphaten zu Probenpräparaten zu vermeiden. Mitochondrien und andere Organellen können geschädigt werden, wenn sie den hohen Phosphatkonzentrationen in Sørensen-Puffern ausgesetzt sind. Außerdem reagiert Cacodylat nicht mit Aldehyd-Fixiermitteln wie aminhaltige Puffer (z. B. Tris). Die Wirksamkeit von Cacodylat bei der Bindung von Lösungen ist möglicherweise eher auf die hemmende Wirkung des Arsenat-Stoffwechsels zurückzuführen als auf eine besondere Pufferkapazität. Good’s Puffer oder Good’s pufferbildende Reagenzien sind eine Liste von 20 pufferbildenden Chemikalien, die von Norman Good und seinem Team zwischen 1966 und 1980 aufgrund ihrer Eignung für die Verwendung in der Biochemie ausgewählt wurden. Diese Puffer werden „Good’s Buffers“ genannt. Ich werde einige von ihnen zitieren, die in der Elektronenmikroskopie verwendet werden.
- HEPES
- MOPS
- Tris , …
