Préparation et utilisation de l’O.T.E.
La préparation de la solution OTE est similaire à l’infusion d’eau de thé à 70°C ou de tampon 0,1M.(*)
– A l’aide d’un agitateur magnétique chauffant réglé à 70°C, dissolvez votre poudre d’OTE à une concentration de 0,2% (car la saturation est atteinte à 0,3%).
– Après dissolution complète (15 à 30 minutes sous agitation à 70°C),
- Filtrez votre solution d’extrait OTE à 0,45µ.
- Conserver dans un petit tube Eppendorf rempli au maximum pour réduire l’air contenant de l’oxygène ou dans un flacon AirLess.
- Conserver dans l’obscurité à 4 °C (lors de la manipulation, toujours laisser les solutions revenir à la température de référence).
- Contraster vos grilles avec l’OTE pendant 15 à 25 minutes, dans l’obscurité, RT
- Egoutter simplement et non pas rincer
- Post-tache 1 à 2 minutes avec du citrate de plomb selon Reynolds (Ref # 11300 de Delta Microscopies)
- Egouttez, rincez brièvement, séchez et soyez prêts à regarder.
*Note : la solution peut être conservée pendant une semaine au maximum, mais plus longtemps dans une solution tampon de cacodylate, dans un flacon sans air (pas de croissance bactérienne).
