Le tampon PHEM est principalement utilis\u00e9 pour les tissus et les cultures cellulaires lors d’\u00e9tudes de coloration immunocytochimique.<\/p>\n
La plupart des antig\u00e8nes, en particulier les antig\u00e8nes intracellulaires, pr\u00e9sentent une meilleure coloration avec le tampon PHEM qu’avec le tampon PBS. Il a \u00e9galement un impact plus limit\u00e9 sur les r\u00e9actions biochimiques et les enzymes.<\/p>\n
L’utilisation de PHEM garantit \u00e9galement une excellente pr\u00e9servation de l’ultrastructure cellulaire, en particulier des microtubules.<\/p>\n
Schliwa, Manfred et al. \u00ab\u00a0Interaction structurelle des composants du cytosquelette\u00a0\u00bb. The Journal of Cell Biology 90.1 (1981): 222-235.
\nJacqueline Montanaro : Am\u00e9lioration de l’ultrastructure des invert\u00e9br\u00e9s marins \u00e0 l’aide de tampons non toxiques.<\/p>\n
Stockage : 4\u00b0C – 8\u00b0C<\/p>\n
Immunofluorescence : Conseils pour l’immunomarquage des cellules
\nConseils d’experts sur l’immunomarquage<\/p>\n
Les chercheurs qui se lancent dans l’immunomarquage sont confront\u00e9s \u00e0 une s\u00e9rie d’obstacles techniques qui peuvent faire la diff\u00e9rence entre l’obtention d’images claires et informatives ou un d\u00e9sordre chaotique, voire l’absence totale de signal…\u00a0\u00bb, explique Nancy Kedersha, professeur de m\u00e9decine \u00e0 la Harvard Med School et directrice de la microscopie confocale \u00e0 l’h\u00f4pital Brigham and Women’s Hospital. \u00ab\u00a0Le pire, c’est que le r\u00e9sultat peut sembler tr\u00e8s pr\u00e9cis mais \u00eatre trompeur ou tout simplement faux.<\/p>\n
Dans cet article de blog invit\u00e9, Nancy offre ses conseils d’expert sur l’immunomarquage et souligne les facteurs \u00e0 prendre en compte lors de la planification de vos exp\u00e9riences d’imagerie utilisant des cellules cultiv\u00e9es…<\/p>\n
Trouver le bon environnement de travail…
\n(… AKA, optimisez vos tampons.)<\/p>\n
Les anticorps sont optimis\u00e9s par le syst\u00e8me immunitaire pour fonctionner dans l’environnement riche en sodium du sang – c’est pourquoi la solution saline tamponn\u00e9e au phosphate (PBS) est g\u00e9n\u00e9ralement le tampon de choix pour la coloration de la surface des cellules. However, the intracellular environment is dominated by potassium, and efforts must be made to recreate these conditions.<\/p>\n
Le syst\u00e8me de tampon utilis\u00e9 pendant les incubations et les lavages apr\u00e8s la fixation (voir ci-dessous) et la perm\u00e9abilisation peut faire une grande diff\u00e9rence dans l’intensit\u00e9 du signal. Des tampons tels que le PHEM ou le CSK ont \u00e9t\u00e9 mis au point pour les cellules perm\u00e9abilis\u00e9es et non fix\u00e9es dans les essais bas\u00e9s sur la fonction ; ces tampons peuvent \u00eatre utilis\u00e9s sur des cellules fix\u00e9es et perm\u00e9abilis\u00e9es \u00e0 la place du PBS et sont particuli\u00e8rement utiles pour les antig\u00e8nes cytosquelettiques ou cytoplasmiques.<\/p>\n
En termes d’intensit\u00e9 du signal (d’apr\u00e8s ma propre exp\u00e9rience), environ 10 % des antig\u00e8nes cellulaires pr\u00e9sentent une bien meilleure coloration dans le tampon PHEM que dans le PBS, 50 % pr\u00e9sentent une coloration mod\u00e9r\u00e9ment meilleure dans le tampon PHEM et 30 % ne pr\u00e9sentent aucune diff\u00e9rence. Les 10 % restants se colorent beaucoup mieux dans le PBS ! C’est pourquoi j’essaie r\u00e9guli\u00e8rement le PHEM et le PBS lorsque j’utilise un anticorps pour la premi\u00e8re fois. Il existe \u00e9galement une s\u00e9lection d’autres tampons que vous pouvez exp\u00e9rimenter (voir ci-dessous).<\/p>\n
Tampon PHEM : Pipes 60 mM, Hepes 25 mM, EGTA 10 mM, MgCl2 2 mM, pH 6.9 : acronyme pour PIPES, HEPES, EGTA et MgCl2.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"
Pr\u00eat \u00e0 l’emploi ou \u00e0 diluer
\nRecommand\u00e9 pour la conservation des lipides
\nEau distill\u00e9e
\nMicrofiltr\u00e9e – St\u00e9rile
\nScell\u00e9 sous gaz neutre
\nEM qualit\u00e9<\/p>\n","protected":false},"featured_media":6729,"template":"","meta":{"_acf_changed":false,"_seopress_titles_title":"","_seopress_titles_desc":"","_seopress_robots_index":"","_seopress_robots_follow":"","_seopress_robots_imageindex":"","_seopress_robots_snippet":"","_seopress_robots_primary_cat":"","_seopress_robots_breadcrumbs":"","_seopress_robots_freeze_modified_date":"","_seopress_robots_custom_modified_date":"","_seopress_robots_canonical":"","_seopress_social_fb_title":"","_seopress_social_fb_desc":"","_seopress_social_fb_img":"","_seopress_social_fb_img_attachment_id":0,"_seopress_social_fb_img_width":0,"_seopress_social_fb_img_height":0,"_seopress_social_twitter_title":"","_seopress_social_twitter_desc":"","_seopress_social_twitter_img":"","_seopress_social_twitter_img_attachment_id":0,"_seopress_social_twitter_img_width":0,"_seopress_social_twitter_img_height":0,"_seopress_redirections_value":"","_seopress_redirections_enabled":"","_seopress_redirections_enabled_regex":"","_seopress_redirections_logged_status":"","_seopress_redirections_param":"","_seopress_redirections_type":0,"_seopress_analysis_target_kw":"","_seopress_news_disabled":"","_seopress_video_disabled":"","_seopress_video":[],"_seopress_pro_schemas_manual":[],"_seopress_pro_rich_snippets_disable_all":"","_seopress_pro_rich_snippets_disable":[],"_seopress_pro_schemas":[],"itsec_x_frame_options":""},"product_brand":[],"product_cat":[227],"product_tag":[],"class_list":["post-4287","product","type-product","status-publish","has-post-thumbnail","product_cat-tampons","pa_buffer-concentration-02m-fr","pa_buffer-concentration-06m-fr","pa_volume-1000ml-fr","pa_volume-125ml-fr","pa_volume-250ml-fr","pa_volume-500ml-fr","first","instock","taxable","shipping-taxable","purchasable","product-type-variable"],"acf":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product\/4287","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/types\/product"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media\/6729"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=4287"}],"wp:term":[{"taxonomy":"product_brand","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product_brand?post=4287"},{"taxonomy":"product_cat","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product_cat?post=4287"},{"taxonomy":"product_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.em-grade.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product_tag?post=4287"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}