On vous fait partager une expérience d’utilisation d’un contrastant non toxique comme l’OTE ,
sous la direction d’Elisabeth ERRAZURIZ-CERDA du CIQLE (Centre d’ Imagerie Quantitative Lyon Est).
Contraste d’échantillons biologiques (hépatocytes, Thrombocytes) à l’aide d’une solution à base d’ O.T.E avant inclusion sur culot de cellules.
protocole :
–Préparation préalable de l’OTE à 0.2% (solution préalablement aliquotée et congelée)
- Fixation glutaraldéhyde 1% en tampon cacodylate de Na 0.1M, pH 7.4 2h à 4 degré
- 3 rinçages en cacodylate de Na 0.1M de quelques heures à 1 nuit à +4°C
- Post fixation : Tétroxyde d’osmium 1% +1.5% de ferrocyanure de potassium dans du tampon cacodylate dans du tampon cacodylate de Na 0.1M, pH 7.4
- Rinçages en tampon cacodylate de Na 0.1M, pH 7.4
- Contraste OTE 0.2% dans du cacodylate 1h TA
- Rinçages à l’eau distillée.
- Déshydratation : éthanol 30° (5min), 50°(5min), 70°(5min), 95°(5min), 100°(3x10min)
- Substitution : Résine Epon 1v. / Ethanol absolu 1v.
- Imprégnation en résine pure Epon sous vide
- Inclusion avec Epon +DMP30. Polymérisation à 60° pendant 48h
- Contraste des coupes ultrafine 5min au citrate de plomb
- Rinçage à l’eau
Conclusion : ce contrastant à base d’extrait de Thé d’Oolong (O.T.E) permet un belle visualisation des constituants intracytoplasmiques et représente un bon substitut à l’acétate d’uranyle .
Notre expérience de contraste avec l’utilisation de l’OTE sur deux types de tissu foie et Thrombocytes est très concluante avec une bonne visualisation des différents compartiments et organites cellulaire. l’OTE « safe stain » nous a permis d’écarter des contrastants toxique comme l’acétate d’uranyle.
Résultats :
Photo1 : Visualisation des contacts entre les mitochondries et les réticulums dans un hépatocyte. 
- Gly : Grains de glycogène , Mit : Mitochondrie, REG : Réticulum endoplasmique rugueux, Lip : Gouttelette lipidique
- Crédit photo : Jennifer Rieusset- CARMEN – INSERM U1060 –Lyon et CIQLE (Centre d’Imagerie Quantitative Lyon Est)
- Équipement: microscope électronique à transmission JEOL EUROPE JEM 1400, caméra Gatan Inc. Orius600
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Photo2 : Comptage des granules alpha dans les plaquettes sanguines de patient.
DTS: Dense tubular système, Gly: Glycogen, OCS: Open canalicular système, λ-G: Alpha granules- Crédit photo : Anaëlle De Wreede- Hospices Civils de Lyon – HCL – Laboratoire d’Hémostase et CIQLE (Centre d’Imagerie Quantitative Lyon Est)
- Équipement: microscope électronique à transmission JEOL EUROPE JEM 1400, caméra Gatan Inc. Orius600
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