Recette de tampon PHEM
Le tampon PHEM a été principalement utilisé pour les tissus et les cultures cellulaires traitées pour des études immunocytochimiques. La plupart des antigènes, en particulier ceux intracellulaires, se colorent mieux avec le PHEM que ceux traités avec le PBS ; ils ont également un effet plus limité sur les réactions biochimiques et les enzymes. Une très bonne préservation de l’ultrastructure cellulaire, notamment des microtubules, est également un avantage de l’utilisation du PHEM.
Les références:
- Schliwa, Manfred et Jonathan Van Blerkom . « Interaction structurelle des composants du cytosquelette. » Le Journal de biologie cellulaire 90.1 (1981) : 222-235.
- Jacqueline Montanaro : Ultrastructure améliorée des invertébrés marins à l’aide de tampons non toxiques
Recette de préparation pour 500ml de Buffer PHEM à 0,2M
Dissoudre dans 400 ml d’eau distillée cette poudre de réactifs dans l’ordre suivant :
| Poudre de réactif | Numéro CAS | poids gr / Molarité | Réf. em-grade |
| HEPES | 7365-45-9 | 0,598 gr. / 5mM | GP19 |
| EGTA | 67-42-5 | 0,380 gr. / 2mM | GP27 |
| MgSO4 , 7H2O | 10034-99-8 | 0,098 gr. / 0,8mM | GP28 |
| Pipes | 5625-37-6 | 1,814 gr. / 12mM | GP21 |
| EAU D. | Compléter jusqu’à 500 ml de volume final et ajuster au pH souhaité avec NaOH | ||
Filtrer la solution à 0,22µ.
