Receita de tampão PHEM
O tampão PHEM tem sido utilizado principalmente para tecidos e culturas de células que estão a ser processados para estudos imunocitoquímicos. A maioria dos antigénios, especialmente os intracelulares, coram melhor utilizando PHEM do que os processados utilizando PBS, que também tem um efeito mais limitado nas reacções bioquímicas e nas enzimas. A excelente preservação da ultra-estrutura celular, nomeadamente dos microtúbulos, é também uma vantagem da utilização da PHEM.
Referências:
- Schliwa, Manfred, and Jonathan Van Blerkom. “Structural interaction of cytoskeletal components.” The Journal of Cell Biology 90.1 (1981): 222-235.
- Jacqueline Montanaro: Melhoria da ultra-estrutura de invertebrados marinhos utilizando tampões não tóxicos
Receita de preparação para 500 ml de tampão PHEM a 0,2M
Dissolver em 400 ml de água destilada os reagentes em pó pela seguinte ordem:
Pó reagente | Número de C.A.S | peso grama | Ref. em-grade |
HEPES | 7365-45-9 | 0.598 gr. | GP19 |
EGTA | 67-42-5 | 0.380 gr. | GP27 |
MgSO4 , 7H2O | 10034-99-8 | 0.098 gr | GP28 |
P.I.P.E.S. | 5625-37-6 | 1.814 gr | GP21 |
WATER D. | Completar o volume final até 500 ml e ajustar o pH desejado com NaOH |
Filtrar a solução até 0,22µ.