La preparación de las muestras para la observación en microscopia electrónica, requiere las mayores precauciones durante la utilización de varias soluciones según su protocolo en varias etapas, el respeto también de varios parámetros determinantes y muy importantes como:
- el pH /Buffer,
- tipo de Buffer según la muestra,
- Osmolaridad de la mezcla de enlace
- temperatura
- duración de la fijación.
The pH of the different cell compartments can vary, so you need to adjust the pH of your buffer solutions according to your studies. In general, in more than 50% of the cases the buffers remain close from 7 to 7.4 A buffer solution maintains approximately the same pH despite the addition of small amounts of an acid or base, or despite dilution.
- phosphate or PB: A simple phosphate buffer is used ubiquitously in biological experiments, as it can be adapted to a variety of pH levels, including isotonic. This wide range is due to phosphoric acid having 3 dissociation constants
- Phosphate Saline or PBS : PBS has many uses because it is isotonic and non-toxic to most cells. These uses include diluting the substance and flushing the cells. PBS with EDTA is also used to release attached and clustered cells. this buffer is used in cell culture under controlled atmosphere in incubators with 5% CO2
- D-PBS: el DPBS es Dulbecco’s PBS y también se conoce como CMF-PBS (libre de calcio-magnesio, o Ca Mg Free). Ca Mg Free).
- cacodilatos : El tampón cacodilato sódico [Na (CH3) 2 AsO2 – 3H2O] es una alternativa al tampón fosfato de Sørensen. Tiene una buena capacidad amortiguadora del pH en el intervalo de pH 5,0-7,4. El cacodilato fue introducido para aplicaciones de microscopía electrónica por Sabatini et al. (1962) como método para evitar la adición de fosfatos adicionales a las preparaciones de muestras. Las mitocondrias y otros orgánulos pueden dañarse cuando se exponen a las altas concentraciones de fosfatos presentes en los tampones de Sørensen. Además, el cacodilato no reacciona con los fijadores aldehídicos como lo hacen los tampones que contienen aminas (por ejemplo, Tris). Su eficacia en soluciones fijadoras puede deberse al efecto inhibidor del metabolismo del arseniato más que a una capacidad tampón especial. Los tampones de Good, o reactivos formadores de tampones de Good, son una lista de 20 sustancias químicas formadoras de tampones seleccionadas por su idoneidad para el uso en bioquímica por Norman Good y su equipo entre 1966 y 1980. Estos tampones se denominan «tampones de Good». Citaré algunos de ellos utilizados en microscopía electrónica.
- HEPES
- MOPS
- Tris , …