La préparation des échantillons pour l’observation en microscopie électronique, nécessite les plus grandes précautions lors de l’utilisation de plusieurs solutions selon votre protocole à différentes étapes, le respect également de différents paramètres déterminants et très importants comme :
- the pH /Buffer,
- type de tampon en fonction de l’échantillon,
- Osmolarité du mélange de fixation
- température
- la durée de la fixation.
The pH of the different cell compartments can vary, so you need to adjust the pH of your buffer solutions according to your studies. In general, in more than 50% of the cases the buffers remain close from 7 to 7.4 A buffer solution maintains approximately the same pH despite the addition of small amounts of an acid or base, or despite dilution.
phosphate or PB: A simple phosphate buffer is used ubiquitously in biological experiments, as it can be adapted to a variety of pH levels, including isotonic. This wide range is due to phosphoric acid having 3 dissociation constants- Tampon Phosphate Saline ou PBS a de nombreuses utilisations car elle est isotonique et non toxique pour la plupart des cellules. Ces utilisations comprennent la dilution de la substance et le rinçage des cellules. Le PBS avec EDTA est également utilisé pour libérer les cellules attachées et groupées. ce tampon est utilisé en culture cellulaire sous atmosphère contrôlée dans des incubateurs à 5% de CO2
- D-PBS: the Les DPBS ou Dulbecco’s PBS est aussi connu sous le nom de CMF-PBS (calcium-magnesium free, or Ca Mg Free). Ca Mg Free).
- cacodylates : Le tampon cacodylate de sodium [Na (CH3) 2 AsO2 – 3H2O] est une alternative au tampon phosphate de Sørensen. Il possède un bon pouvoir tampon dans la plage de pH 5,0-7,4. Le cacodylate a été introduit dans les applications de microscopie électronique par Sabatini et al. (1962) pour éviter d’ajouter des phosphates supplémentaires aux préparations d’échantillons. Les mitochondries et autres organites peuvent être endommagés lorsqu’ils sont exposés aux fortes concentrations de phosphates présentes dans les tampons de Sørensen. En outre, le cacodylate ne réagit pas avec les fixateurs aldéhydiques comme le font les tampons contenant des amines (par exemple Tris). Son efficacité dans les solutions de liaison peut résulter de l’effet inhibiteur du métabolisme de l’arséniate plutôt que d’un pouvoir tampon particulier. Les tampons de Good, ou réactifs tampons de Good, sont une liste de 20 produits chimiques formant des tampons, sélectionnés par Norman Good et son équipe de 1966 à 1980 pour leur aptitude à être utilisés en biochimie. Ces tampons sont appelés « tampons de Good ». J’en citerai quelques-uns utilisés en microscopie électronique.
- HEPES
- MOPS
- Tris , …
